مواد و روشها و انتخاب دام
1) آماده سازی تعداد 2000 اسلاید جهت تهیه گسترش خون از رگهای جداری و رگهای عمقی و بررسی ریزبینی
2) آماده سازی سوزنهای پونکسیون جهت تهیه بیوپسی از غدد لنفی سطحی
( بخصوص پیش کتفی) تهیه گسترش بمنظور بررسی ریزبینی
3) تهیه لوله های ونوجکت(Veno ject ) حدود 2000 عدد جهت گرفتن خون و تهیه سرم و نگهداری آنها در منهای بیست در جه تا موقع انجام تست های سرمی( تست الیزا)
4) تهیه آنتی ژن لیوفیلیزه وآنتی ژن سونیکه
1-4 روش تهیه آنتی ژن لیوفیلیزه جهت انجام تست تیلرین
سلولهای میلوئید آلوده به شیزونت تیلریاآنولاتا (Schizont Infected myeloid cells) رااز پاساژ های پائین سویه های جداشده تهیه نموده و سپس سلولهای تهیه شده را در دور rpm 1600با محلول PBS دوبار شستشو داده سپس برمبنای کنسانتره سلولی را تهیه نموده و در شیشه های مخصوص لیوفیلیزه 4 میلی لیتری و 8 میلی لیتری هر کدام یک میلی لینر تقسیم و سپس با دستگاه لیوفیلیزه آنها را لیوفیلیزه نموده و تا موقع مصرف در نگهداری می گردند. در موقع مصرف به هر شیشه یک میلی لیتر آب دوبار تقطیر شده استریل اضافه نموده و پس از تکان دادن بعنوان آنتی ژن از آن استفاده می شود .لازم به یادآوری است که میزان سلول در کنسانتره باید باندازه ای باشد که غلظت پروتئین مورد لزوم برای تزریق بر مبنای در نظر گرفته می شود.
2-4 روش تهیه آنتی ژن به روش سونیکاسیون جهت انجام تست تیلرین
کنسانتره سلولهای میلوئید آلوده به شیزونت تیلریاآنولاتا همانند روش لیوفیلیزه تهیه نموده و تعداد سلول را در هر میلی لیتر به میرسانیم و پس از دو بار شستشو با PBS در دور 1600 در دقیقه با دستگاه سونیکاتور به برای مدت 5 دقیقه سونیکه نموده و در g 10000 به مدت ده دقیقه سانتریفوژ شده و به مدت سه بار با PBS شستشو داده می شود.
و مایع روئی به عنوان آنتی ژن درنظر گرفته می شود سپس توتال پروتئین آنتی ژن تهیه شده بر مبنای بدست آورده و آن را تا موقع مصرف در چهار درجه سانتی گراد نگهداری مینمائیم.
انتخاب دام جهت بررسی های آزمایشگاهی
در طی سالهای 84-83 جمعاً چهار رأس گوساله هلندی بین 5-4 ماه از دامداریهایی که تیلریوز در سال های گذشته نداشته انتخاب شدند و در اصطبل فاقد کنه(Tick free stable ) نگهداری شدند. گوساله ها مدت یک ما ه مورد بررسی های ضروری قرار گرفتند از عدم آلودگی آنها اطمینان حاصل شد و سپس جهت بررسی طرح تداوم ایمنی مورد استفاده قرار گرفتند.
روش تهیه آنتی ژن تیلر یا آنولاتا به روش هموژنیزه با دستگاه (Homogenizer)
1) پاساژ سلول های میلوئید شیزونت دار تیلریاآنولاتا در 10 ساعت به حجم تقریبی هر کدام 150ml (Kachani1992 )
2) جمع آوری سلولها در شروع مرحله ایستا(Stationary )
3) سانتریفوژ نمودن و حذف محیط کشت توسط سه بار شستشو با PBS
4) ذوب و منجمدنمودن سلولها در و برای دوبار
5) هموژنیزه کردن سلولها د رسه سیکل 10 دقیقه در دور( 260rpm )
6) دوبار ذوب و انجماد نمودن مجدد
7) سانتریفوژ در دو نوبت در دور 2000g به مدت 30 دقیقه
8) استفاده از مایع روئی بعنوان آنتی ژن
9) پروتئین سنجی اندازه گیری پروتئین، تنظیم آنتی ژن بر مبنای غلظت توتال پروتئین
انتخاب دام جهت بررسی های صحرائی
د رتاریخ 31/6/83 و 7/7/83 طبق ضوابط ذیل جمعا 92 رأس از هفت گاوداری با نظر متخصص اپیدمیولوژیی انتخاب گردید. ضوابط در نظر گرفته شده جهت انتخاب دامهای تحت بررسی عبارت بودند از:
1) عاری بودن دامها از الودگی های تک یاخته ای
2) مناسب بودن وضع عمومی دامها با اشتهای خوب و عدم لاغری
3) عدم آلودگی به بیماری های باکتریائی ، ویروسی و قارچی
4) عدم آلودگی به انگلهای درونی
5) مایه کوبی مرتب بر علیه بیماریهای باکتریایی و ویروسی( شاربن، پاسترولوز، طاعون، تب برفکی و شاربن عالمتی. در اسفند ماه 1384 کلیه دامهای گروه اول واکسینه شده گروههای دوم و سوم واکسینه نشده اند.
شامل 21 صفحه فایل word قابل ویرایش
دانلود تحقیق مایه کوبی دامها بر ضد تیلریوز گاوی در بوئین زهرا
